DNA Fingerprint

Cada pessoa é geneticamente diferente entre si. Cada um de nós possui sequencias de nucleónicas diferentes. Se usar-mos as enzimas de restrição, irão formar, portanto, sectores de DNA de diferentes tamanhos, tamanhos esses que diferem de pessoa para pessoa. Ao submeter essas porções a eletroforese (aplicar numa placa um campo eléctrico, em que um extremo seja o pólo negativo, e no outro o positivo). O DNA é de carga negativa, desloca-se portanto para a extremidade positiva. As porções maiores, mais pesadas, são mais lentas e ficam para trás. As mais leves, deslocam-se mais rápido, formando assim marcas. Por comparação com outras amostras, podemos ver se pertencem ao mesmo individuo, se são progenitores, irmãos, etc.

 

 

 

 Bibliografia:

http://www.bioloja.com/info/info.asp?id=70

Reacção de Polimerização em Cadeia (PCR)

A reacção de polimerização em cadeia (PCR, do inglês Polymerase Chain Reaction) é uma técnica da engenharia genética usada para amplificar amostras de DNA. Podemos encontrar usos desta técnica, por exemplo, na criminologia forense, onde por vezes é necessário ampliar uma pequena amostra do suspeito, para fazer testes de comparação. É composta por 3 fases: desnaturação, hibridização e extensão.

 

Desnaturação – Esta é a primeira fase. Consiste em aquecer a amostra original de DNA a 95ºC para quebrar as pontes de hidrogénio entre os nucleótidos, separando assim as duas cadeias de DNA.

 

Hibridização – Consiste na adição de pequenos grupos e bases complementares às cadeias separadas, denominados Primers, ou iniciadores. Servem para que as DNA Polimerases possam iniciar o seu processo na fase de extensão. Ocorre entre 45ºC e 60ºC.

 

Extensão – Adicionam-se DNA Polimerases ao preparado com as cadeias separadas, já com os primers intrudodidos. Adicionam-se também bases azotadas. As DNA polimerases criaram uma cadeia complementar a cada uma das duas cadeias originais, usando as bases azotadas livres que se ligaram por complementaridade. No final do processo, duas novas cadeias duplas de DNA estarão formadas, e serão iguais à cadeia original. Esta fase ocorre a 72ºC.

 

 

Bibliografia

SILVA, Amparo Dias da; SANTOS, Maria Ermelinda; MESQUITA, Almira Fernandes; BALDAIA, Ludovina; FÉLIX, José Mário; Terra, Universo de Vida; Porto: PortoEditora, 2009.

 

http://www.cientic.com/portal/index.php?option=com_content&view=article&id=88%3Adiapositivos-de-engenharia-genetica&catid=36%3Apatrimonio-genetico&Itemid=107

 

http://www.youtube.com/watch?v=eEcy9k_KsDI

Engenharia Genética – cDNA

cDNA, ou DNA Complementar, é uma cadeia de DNA formada a partir de uma molécula de mRNA, através de um processo de transcrição reversa.

 

Retrovírus – retrovirus formam a família Retroviridae e são caracterizados por possuirem um genora constituido por uma cadeia de mRNA simples. Infectam a célula hospedeira injectando nela a cadeia de mRNA e as enzimas transcriptase reversa.

 

 

Transcriptase reversa – são enzimas que formam cadeias de DNA a partir de uma molécula de mRNA simples, utilizando nucleótidos livres para constituir a cadeia de DNA final, numa fase denominada por retrotranscrição. Estas enzimas apenas podem ser encontrados em retrovirus.

 

 

Técnica do DNA Complementar

 

Uma molécula de mRNA é posta em contacto com a enzima Transcriptase Reversa (proveniente dos retrovirus). Ocorre uma retrotranscrição, criando uma molécula hibrida de DNA/mRNA. A cadeia de mRNA é degenerada, ficando apenas a cadeia de DNA. Com a enzima DNA-polimerase, formase a partir de nucleótidos livres depositados, a cadeia complementar de DNA é formada, criando assim uma cadeia de dupla hélice de DNA, que será incorporada num vector (exemplo: plasmídeo) e introduzida na bactéria.

 

 

Fonte:

 

» http://en.wikipedia.org/wiki/Retrovirus

 

» OSÓRIO, Lígia (2007) Preparar os Testes. Perafita: Arial Editores
SILVIA, Amparo; SANTOS, Maria; MESQUITA, Almira; BALDAIA, Ludovina; FELIX, José (2009) Terra, Universo de Vida. Porto: Porto Editora

Engenharia Genética - DNA Recombinante

DNA Recombinante é qualquer cadeia de DNA que tenha sido alterada propositadamente, pela inserção ou remoção de um gene. É muitas vezes utilizado na agricultura para fornecer as plantas resistência contra doenças que plantas doutra espécie são resistentes, implantando o gene das plantas resistentes no DNA das plantas não resistentes. Também é usado na produção artificial de hormonas, como a insulina.

 

Enzimas de Restrição – são enzimas que cortam qualquer molécula de DNA que apresente determinada sequência de base nucleótidicas. Cada enzima diferente corta sempre a mesma sequencia de DNA em qualquer cadeia de qualquer ser vivo. Exemplos de enzimas são Eco RI, proveniente da bactéria Escherichia coli e a Hind III, proveniente da bactéria Haemophilus influenzae. As enzimas de restrição são usadas como mecanismo de defesa das bactérias contra DNAs virais: o DNA viral injectado é cortado, destruindo-o.

 

 

 

Método de produção de DNA Recombinante

 

As bactérias possuem enzimas de restrição que cortam o DNA sempre pelas mesmas bases em todas as moléculas de DNA de todas as espécies de seres vivos. Estas enzimas cortam o plasmídeo de uma bactéria, bem como a porção de DNA em estudo da cadeia de DNA original. O plasmídeo é uma cadeia circular de DNA não vital para a bactéria, mas cujas instruções nele contidas são transcritas. Junta-se o plasmídeo, já cortado, à porção de DNA em estudo, adicionando DNA ligases, formando assim um plasmídeo de DNA recombinado. Este novo plasmídeo é reinserido na bactéria. Com a multiplicação celular, grandes quantidades do gene serão multiplicadas com a divisão celular, formando também grandes quantidades daquilo que o gene codifica. Este método pode ser usado, por exemplo, para produzir de forma rápida e eficaz a hormona Insulina, necessária a diabéticos.

 

 

Bibliografia

» OSÓRIO, Lígia (2007) Preparar os Testes. Perafita: Arial Editores
SILVIA, Amparo; SANTOS, Maria; MESQUITA, Almira; BALDAIA, Ludovina; FELIX, José (2009) Terra, Universo de Vida. Porto: Porto Editora

 

» http://pt.wikipedia.org/wiki/Enzima_de_restri%C3%A7%C3%A3o